Optimisation des conditions de cycle PCR pour le kit VeriFiler Plus au CERBA : impact sur la qualité des profils ADN

Résumé

Introduction : En début 2012, les premiers profils ADN ont été réalisés au CERBA à l’aide du KIT identiFiler Direct qui permettait d’analyser 16 marqueurs. Un peu près de 10 ans après, le nombre de marqueurs analysés est passé à 21. De nos jours dans nos laboratoires ce sont 25 marqueurs qui sont étudiés pour la détermination du profil génétique sur un plateau technique de dernière génération. Méthode : La méthode actuelle a fait l’objet d’évaluation sur un échantillon de 20 prélèvements. L’objectif générale était d’évaluer la fiabilité de la méthode sur le plateau technique renforcé. La présente étude était transversale, elle a consisté à un prélèvement de sang et de salive sur chacun des 10 sujets volontaires ayant donné librement leur consentement. Les échantillons ont été testés suivant quatre protocoles différents par le nombre de cycles de la PCR multiplex. Les amplicons ont été séquencés à l’aide du Seqstudio de Applied Biosystems. Les données ont été analysées avec le logiciel GeneMapper. Conclusion : Les protocoles de 25 ; 26 et 27 cycles ont permis d’obtenir de meilleurs résultats avec plus de 90% de profils parfaits. Cette approche pourrait permettre d’optimiser d’autre protocoles pour l’analyse de matrices de diverse nature.